酶标板详解：从基础知识到实用技巧的完整指南

酶标板，也叫酶联免疫吸附实验板（ELISA Plate），是一种常见的实验工具，广泛用于生物学、医学、食品检测等领域的实验中。它主要用于检测液体样本中的抗体、抗原、蛋白质等。无论是疾病诊断，还是食品安全，酶标板的作用都不可忽视。

酶标板常由聚苯乙xi制成,符合ANSI/SBS 标准尺寸,经表面处理后蛋白结合能力大大增强,可达300-400nglgG/cm,主要结合的蛋白分子量>10kD,使用该类酶标板可提高敏感性,并可相对减少包被蛋白的浓度和用量。

酶标板的结构与种类

酶标板通常是由96个小孔组成，每个孔用于加样检测。常见的酶标板孔数为96孔（有些高通量实验用384孔或更高孔数）。这些孔底部一般采用塑料或聚苯乙xi材料，保证样本和试剂的良好吸附和反应。

根据实验需求，不同的孔板颜色设计有所不同，有透明款主要用于光吸收检测、白色酶标板主要用于化学发光和底物显色检测、黑色酶标板主要用于荧光检测

 

酶标板的工作原理

酶标板在ELISA实验中起着至关重要的作用。它基于一种酶标记抗体，能够检测固定在96孔或384孔酶标板上的抗原，加入的底物可以产生与原始样品中存在的抗原量相关的颜色变化或光信号。这些抗体与样本中的目标分子发生反应，结合后通过酶的催化反应生成可测量的颜色变化，最终通过酶标仪进行检测分析。这是一种简单而快速的技术，用于检测附着在固体表面的抗体或抗原。

这种方法不仅高效，而且能提供定量的检测结果，广泛用于检测病毒抗体、细菌抗原、血液中的激素水平等。

酶标板怎么选

酶标板的主要材质是聚苯乙xi（PS），通过疏水键、离子键或共价结合等方式，将抗原、抗体等生物分子吸附到板孔内表面。

根据实验的需求选择合适的酶标板，是实验成功的第一步。

NEST酶标板经表面处理后蛋白结合能力大大増强，可达400－500ng IgG/cm²，主要结合的蛋白分子量>10kD，使用该类酶标板可提高敏感性，并可相对减少包被蛋白的浓度和用量。

Part.01

不同颜色

选择合适的酶标板颜色取决于实验的具体需求和条件。目前NEST有透明、白色及黑色三款酶标板可供选择。

▶ 透明酶标板：

适用场景：主要用于光吸收检测，如细胞培养和常规比色分析。

注意事项：不适合发光检测，因为光会向各个方向发散，影响检测结果。

▶ 白色酶标板：

适用场景：高反光性，适合化学发光和底物显色检测，灵敏度高。

注意事项：适用于较弱的光检测，如一般的化学发光和底物显色。

▶ 黑色酶标板：

适用场景：光吸收特性强，适合荧光检测，有效消除背景干扰。

注意事项：适用于检测较强的光，如荧光检测；也可以减少非特异反应的影响。

Part.02

可拆卸&不可拆卸

▶ 不可拆酶标板：板条与板架连为一体；

▶ 可拆酶标板：板条与板架分离，单孔可拆，灵活性高，尤其适合样本量不固定的实验，避免不必要的浪费。

                                              拆装动作 

当需要将板条拆下时，可从板条正面两端轻轻向上掰动，然后抠取下来，如上图所示。

若板条太紧难以掰动，可用手指抵住板条底部轻轻向上顶，然后如上图将板条抠取下来。

务必要戴好无尘手套，以免污染板条而影响板条的透光性。

不可从板条的一端强行掰取，容易造成板条断裂。

在装板条时，要注意方向，板条两端分别设计成方形和半圆形，半圆形那端必须装在有凸起台阶的卡槽内（箭头所在处），切勿装反。

将板条装入板框后，在两侧和中间部位都需要进行按压，压实后方可进行后续实验。

酶标板的使用方法与技巧

1 加样的技巧

• 准确加样：确保每孔加样量一致，避免过量或不足。通常每孔50-200μL。

• 均匀加样：用移液枪垂直加样，避免液体残留在孔壁或孔底。
• 避免交叉污染：每次加样更换吸头，确保不同样本不交叉污染。

2 混匀与孵育

• 混匀：加样后轻轻摇晃板子或使用振荡器（通常在200-300 rpm），确保液体均匀混合。
• 温度与时间控制：根据实验要求设定孵育温度和时间（通常37℃孵育1小时或室温过夜）。

3 防止气泡与污染

• 避免气泡产生：加样时要缓慢且稳定地吸取液体，避免在液体中产生气泡，因为气泡会影响读数结果。
• 防止交叉污染：每个样本应使用独立的吸头，避免样本之间的交叉污染。使用一次性吸头有助于避免这种问题。

4 孔板处理与清洁

• 预处理：用PBS清洗液冲洗孔板，去除杂质。
• 避免触摸孔底：操作时避免直接接触孔底，使用镊子或戴手套。
• 清洁与储存：使用去离子水清洗，存放在干燥阴凉处。

5 洗涤步骤

• 洗涤彻底：用PBS清洗液多次清洗，确保未结合的试剂去除干净。
• 避免震动：洗涤时轻轻晃动或使用自动洗板机。

6 检测与数据分析

• 酶标仪设置：选择合适波长（通常450nm），读取吸光度。
• 空白对照与标准品：设置空白孔和标准品孔，确保数据准确。

7 防止实验误差

• 同批次使用：尽量使用同一批次的酶标板和试剂。
• 对照孔设置：设置高低浓度对照孔，确保数据稳定。
• 重复实验：建议进行重复实验，排除偶然误差，提高结果的可靠性。
  

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