干货 | CoIP, CHIP, RIP 分不清？

1362 人阅读发布时间：2024-01-23 14:17

免疫沉淀（Immunoprecipitation），又被称为 IP，是一种利用抗体与抗原之间的特异性结合，以及细菌蛋白质的“protein A/G”与抗体 FC 片段的结合特性开发出的技术。简而言之，抗原与抗体之间的关系就像是一把钥匙对应一把锁，而“protein A/G”则像是一条钥匙链，能够帮助我们快速找到对应的钥匙（抗体）。
CoIP、CHIP 和 RIP 这些技术之间的差异主要在于与抗体结合的物质。
CoIP 中的 B 代表蛋白质，CHIP 中的 B 代表 DNA，而 RIP 中的 B 则代表 RNA。

1、CoIP 技术
CoIP 技术利用抗体的特异性反应来纯化和富集目标蛋白质。具体流程如下：先将抗体与细胞裂解液或表达上清中的相应蛋白结合，再与蛋白 A/G 偶联的琼脂糖或 Sepharose 珠子进行孵育。通过离心，我们可以得到一个包含珠子、蛋白 A/G、抗体和目标蛋白的复合物（如果使用 MagBeads，则可以通过磁力进行分离）。在高温和还原剂的作用下，抗原与抗体分离，收集上清液，其中包含抗体、目标蛋白和一些杂蛋白。
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2、CHIP 技术
CHIP 技术的原理则是利用抗原 A 与 DNA B 的结合，通过纯化分析结合后的目的 DNA 片段，来获取蛋白质与 DNA 相互作用的信息。具体流程与 CoIP 类似：先将抗体与细胞裂解液或表达上清中的相应蛋白结合，再与蛋白 A/G 偶联的琼脂糖或 Sepharose 珠子进行孵育。通过离心，我们可以得到一个包含珠子、蛋白 A/G、抗体和目标蛋白的复合物（如果使用 MagBeads，则可以通过磁力进行分离）。在高温和还原剂的作用下，抗原与抗体分离，收集上清液，其中包含抗体、目标蛋白和一些杂蛋白。
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3、RIP 技术
RIP 技术的基本原理是利用抗原 A 与 RNA B 的结合，通过对目标 RNA 片段进行纯化分析，来获取 RNA 与蛋白质相互作用的详细信息。具体流程如下：首先，将抗体与细胞裂解液或表达上清液中的相应蛋白质结合。接着，将这一混合物与蛋白 A/G 偶联的琼脂糖或 Sepharose 珠子进行孵育。通过离心，我们可以获得一个珠子-蛋白 A/G-抗体-目标蛋白质的复合物（如果使用 MagBeads，则可以通过磁力分离得到这一复合物）。在高温和还原剂的作用下，抗原与抗体分离，收集上清液。上清液中包括抗体、目标蛋白质和少量其他蛋白质。
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