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解决方案|外泌体纯化&检测
447 人阅读发布时间：2023-03-21 14:31
外泌体是一种细胞分泌出来的小囊泡，其中包含有膜蛋白、RNA、脂质等多种生物大分子。这些物质在许多生理和病理状态中发挥着重要作用，因此外泌体的研究备受关注。为了从细胞培养物中纯化出外泌体，以下是一些基本步骤：
细胞培养：首先需要培养产生外泌体的细胞，比如肝细胞、肺细胞、肾细胞、干细胞等。根据不同的细胞类型，需要采用不同的培养基和培养条件。
细胞收集：当细胞达到一定密度后，可以将其收集下来。如果需要纯化外泌体，建议使用低血清或无血清培养基，以避免血清蛋白对外泌体的干扰。
离心：将细胞培养物离心，去除细胞碎片和大颗粒物质。通常建议使用低速离心（例如300×g）和高速离心（例如10,000×g）进行两次离心，以确保去除杂质。
超速离心：将上述离心液用超速离心（例如100,000×g）离心，收集上清液，此时上清液中应当含有外泌体。
洗涤：用PBS等缓冲液洗涤上清液，去除残留的蛋白和杂质。
再次离心：将洗涤后的上清液再次进行超速离心（例如100,000×g），去除杂质和残留缓冲液。
外泌体收集：将上述离心液中的沉淀物收集下来，即为外泌体。
上述步骤仅为外泌体纯化的基本步骤，具体操作过程仍需根据实验需求进行调整和优化。
检测外泌体，以下是几种常用的方法：
电子显微镜（EM）：EM是检测外泌体最直接的方法之一。使用EM可以观察到外泌体的形态和大小，但无法获得外泌体内部的详细信息。
免疫印迹（Western blot）：Western blot是检测外泌体中特定蛋白的一种方法。首先需要使用抗体识别外泌体中的蛋白，然后使用化学发光或染色方法检测抗体结合的蛋白。
流式细胞术（flow cytometry）：流式细胞术可以检测外泌体的大小和数量。首先需要将外泌体标记上荧光染料，然后使用流式细胞仪检测荧光信号。
纳米粒子追踪技术（nanoparticle tracking analysis）：纳米粒子追踪技术可以用于检测外泌体的大小和数量。该技术使用激光追踪纳米粒子的运动轨迹，从而推断出外泌体的大小和浓度。
上述方法各有优缺点，具体应用时需要根据实验需求选择合适的方法进行检测。
细胞培养：首先需要培养产生外泌体的细胞，比如肝细胞、肺细胞、肾细胞、干细胞等。根据不同的细胞类型，需要采用不同的培养基和培养条件。
细胞收集：当细胞达到一定密度后，可以将其收集下来。如果需要纯化外泌体，建议使用低血清或无血清培养基，以避免血清蛋白对外泌体的干扰。
离心：将细胞培养物离心，去除细胞碎片和大颗粒物质。通常建议使用低速离心（例如300×g）和高速离心（例如10,000×g）进行两次离心，以确保去除杂质。
超速离心：将上述离心液用超速离心（例如100,000×g）离心，收集上清液，此时上清液中应当含有外泌体。
洗涤：用PBS等缓冲液洗涤上清液，去除残留的蛋白和杂质。
再次离心：将洗涤后的上清液再次进行超速离心（例如100,000×g），去除杂质和残留缓冲液。
外泌体收集：将上述离心液中的沉淀物收集下来，即为外泌体。
上述步骤仅为外泌体纯化的基本步骤，具体操作过程仍需根据实验需求进行调整和优化。
检测外泌体，以下是几种常用的方法：
电子显微镜（EM）：EM是检测外泌体最直接的方法之一。使用EM可以观察到外泌体的形态和大小，但无法获得外泌体内部的详细信息。
免疫印迹（Western blot）：Western blot是检测外泌体中特定蛋白的一种方法。首先需要使用抗体识别外泌体中的蛋白，然后使用化学发光或染色方法检测抗体结合的蛋白。
流式细胞术（flow cytometry）：流式细胞术可以检测外泌体的大小和数量。首先需要将外泌体标记上荧光染料，然后使用流式细胞仪检测荧光信号。
纳米粒子追踪技术（nanoparticle tracking analysis）：纳米粒子追踪技术可以用于检测外泌体的大小和数量。该技术使用激光追踪纳米粒子的运动轨迹，从而推断出外泌体的大小和浓度。
上述方法各有优缺点，具体应用时需要根据实验需求选择合适的方法进行检测。