干货|告别繁琐，15min轻松分离PBMC

PBMC

外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells ，PBMC）是免疫系统的关键组成部分,因此在免疫学、传染病、恶性肿瘤、疫苗研发、移植治疗、个性化医学和毒理学等领域作为最基础的实验原料被广泛使用。

从血液制备PBMC是分离特定免疫细胞亚群之前常见的一个步骤。最常用的PBMC分选方法是使用密度梯度离心液进行离心。

                                            使用普通离心管分离PBMC的标准流程

 

听起来似乎很简单，但小心翼翼的加样、繁琐的步骤将拉长实验时间、增加错误率。

PBMC分选神器:
耐思外周血淋巴细胞分离管

耐思外周血淋巴细胞分离管通过独特的嵌套帮助你完美避坑。

⚫ 无需小心翼翼地加样 

⚫ 无需小心地吸取细胞白膜层收集细胞 

⚫ 避免红细胞和粒细胞再次污染   

短短的15min，通过离心、倾倒即可完成PBMC分选。



 

分离管特性

1.  快速分离，仅需15min即可迅速完成PBMC分选。

2.  操作简单，无需小心而费力地将样本加于密度梯度离心液面，收集PBMCs细胞时，只需从离心管中简单倾倒，无需其他技术性的专业操作。

3.  一致性好，降低错误，减少不同用户间的操作差异。

4.  电子束灭菌，SAL=10^-6

5.  无热源、无核酸酶

使用方法

⚫ 前期准备

1.  将分离液的温度平衡至室温（RT），避光。

2.  样品准备：抗凝全血或骨髓。根据样本浓度状态，可适当用生理盐水稀释，提高分离效果。

⚫ 分离过程

1.  将分离液用移液管从分离管嵌套的中心孔中加入：15ml的分离管需要加入约4ml分离液；50ml的分离管需要加入约13ml分离液，确保分离液覆盖嵌套上方。

2.  将抗凝样本沿管壁缓慢倒入或用移液管沿管壁缓慢加入到分离管中。

3.  室温下离心10min，离心力为1200 x g。

4.  收获PBMCs细胞，将分离管中上清倒入另一干净离心管中，分离管中的嵌套能有效避免红细胞和粒细胞再次污染。（注意：离心后倾倒收获细胞前，也可先吸取采集或丢弃最上层血浆层，有助于减少细胞被血小板污染。）

5.  用PBS洗涤PBMCs细胞，在250 x g离心力下离心10min。

6.  按步骤5重复洗涤2次，用5ml PBS缓冲液重悬细胞。

                                   使用耐思外周血淋巴细胞分离管分离PBMC操作步骤

 

离心后液体分离情况（从上到下）：a血浆层；b富集的细胞部分（PBMCs）；c分离液；d嵌套；e沉淀（红细胞和粒细胞）。

 

注意事项

1.  可用于人类外周血、骨髓和脐带血样本。不适用于血凝等异常样本或超过48小时的样本。

2.  15ml的分离管建议使用4-9ml样本；50ml的分离管建议使用13-30ml样本。

3.  对于放置24h以上的样本，建议离心时间加长。

4.  离心后收获细胞前，也可先吸取采集或丢弃最上层血浆层，有助于防止被血小板污染。

5.  离心后倾倒上清时不要将分离管倒置2s以上。

6.  分离管请勿重复使用。

7.  离心后，细胞可能聚集在富集层以上的分离管的管壁上。这种聚合是正常的，受样本质量、样本放置时间和抗凝剂类型的影响。此聚合与分离管的使用无关。细胞可以通过使用移液管尖端轻刮聚集团的一侧来清除。

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