警惕细胞「拖延症」！

什么是细胞迁移能力？

细胞迁移是最古老也是最重要的动物细胞生理活动之一，看似简单的一个动作实际上是高度动态和协调的复杂过程，包括胞外信号诱导、微丝系统提供动力、整合素介导的黏附结构提供附着力等。

细胞跨出的每一小步，是机体化学调控的一大步，在胚胎发育、组织形成、免疫活动、损伤修复等生理过程，以及炎症、癌症转移等病理过程中都有着极其重要的作用。

因此拒绝细胞「拖延症」，密切关注细胞迁移能力，成为细胞诊断的必修课！

 

什么是细胞小室？

 

 

细胞小室在细胞实验中很常用。这是一类有通透性的杯状的装置，可以认为这是一种膜滤器，也可认为是一种有通透性的支架。

 

上室底部的薄膜是整个实验装置的核心部分，需要具有通透性、可观察性、高化学兼容性。

NEST 选用具有全面化学适用性的聚酯膜及聚碳酯膜，通过 TC 处理后便于细胞贴壁培养。

聚碳酸酯膜（PC）

膜孔密度较高，允许通过膜完成更多交换，而且具有优秀的细胞粘附特性，所以适用于转运研究和其他需要实现最佳细胞生长的应用。

另外 PC 膜也非常适用于屏障分析。在较长时段内相比其他膜材料，具有更高、更持续且更稳定的跨上皮电阻 (TEER) 值。PC 膜无需基质包被即可培养大多数类型细胞。

聚脂膜（PET）

PET 膜孔密度较低，具有更好的光学清晰度，有利于显微镜细胞观察以及细胞成像。

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待测细胞的直径决定了薄膜孔径的选择。通常情况下，薄膜的孔径应略小于细胞的直径以防止细胞直接漏入到下室。

NEST 提供多种规格孔径，满足共培养实验、趋化实验、细胞迁移实验、细胞侵袭以及药物转运多种需求。

 

小于 3μm 孔径的小室，细胞不会迁移通过。涉及到细胞迁移的实验，要用 5.0、8.0μm 的小室，这样上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室。

 

 

鉴定方式

1）首先，细胞处理∶处于对数生长期的细胞，消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用 PBS 洗 1 - 2 遍，用无血清培养基重悬。

2）铺板∶24 孔板下加入 600ul 含 10%FBS 的培养基，取细胞悬液 150μl 加入细胞小室，每孔，10000 个细胞。

3）细胞培养∶37℃、5%CO2 培养箱中培养 20～24 h。

4）固定∶取出细胞小室，弃去孔中培养液、用无钙的 PBS 洗 2 遍，4% 多聚甲醛固定 30 分钟甚至过夜。

5）染色∶0.1% 结晶紫染色 20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用 PBS 洗 3 遍。

6）显微镜下计数。

注意事项

1. 细胞计数时一定要尽量严格，以保证各孔细胞密度均匀。为了避免各孔间由于细胞计数引入的误差，一般需要重复三个副孔。

2. 种细胞时尽量从孔的中间位置滴加，力度柔和，速度尽量慢，以免冲击力太大破坏胶面；

3. 避免气泡产生。注意小室底部气泡的产生。小室在放入孔板时，常常会因为液体表面张力的原因在小室底部形成气泡，气泡导致的底部液面不均会严重影响细胞侵袭和迁移能力， 因此在放置小室时，应轻柔匀速，若发现底部产生气泡，不要拍打板子 (这样做会使刚铺好的细胞重新聚团)，而应将小室轻轻提起，重新放置直至无气泡。

 

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