耐思课堂 | 细胞培养总失败？很多问题来自“污染”

当实验真正开始时，很多实验人员都会遇到一个几乎无法避免的问题—— 细胞污染。

轻则影响细胞状态和实验数据， 重则导致整批细胞报废，实验周期被迫重新开始。

那么，细胞培养中的污染究竟从哪里来？又该如何识别和避免？

01为什么细胞培养特别容易污染？

细胞培养（Cell Culture），是指在体外人工控制的条件下，为细胞提供适宜的生存环境，使其能够存活、增殖，并尽可能保持其原有的生物学特性。

简单理解，就是：细胞培养体系本质上是一个非常适合微生物生长的环境。培养基中富含：

•葡萄糖

•氨基酸

•维生素

•血清蛋白

同时培养箱还提供：

•37℃恒温

•稳定湿度

•适宜气体环境

这些条件不仅适合细胞生长，同样也非常适合细菌、真菌等微生物快速繁殖。一旦污染发生，污染微生物会：与细胞竞争营养、改变培养液 pH、释放代谢产物影响细胞状态最终导致细胞死亡或实验结果失真

因此，在细胞培养中，无菌操作始终是最核心的基本原则之一。

02细胞培养中最常见的 4 种污染

1 细菌污染（最常见）

细菌污染通常发展非常迅速，是实验室中最常见的污染类型。

常见表现：

•培养液快速变浑浊

•培养基颜色变黄

•显微镜下可见大量微小颗粒快速运动

常见来源：

•操作过程中无菌控制不严格

•枪头、移液管或培养瓶口接触污染

•培养基或血清污染

一旦发生细菌污染，通常不建议继续培养，应及时废弃污染细胞并彻底清洁培养设备。

2 真菌污染

真菌污染虽然发生频率低于细菌，但扩散速度同样很快。

常见表现：

•培养液中出现絮状或棉絮状漂浮物

•显微镜下可见丝状或分枝结构

•细胞贴壁状态明显变差

真菌孢子广泛存在于空气中，因此在操作过程中暴露时间过长或操作环境不洁净，都可能增加污染风险。

3 支原体污染（最隐蔽）

支原体污染是细胞培养中最隐蔽、也最容易被忽视的问题之一。

与细菌或真菌不同，支原体污染通常不会导致培养液浑浊，因此肉眼很难发现。

可能出现的情况包括：

•细胞生长速度明显变慢

•细胞形态发生变化

•实验数据重复性下降

因此，实验室通常需要定期进行支原体检测，确保细胞体系的可靠性。

4 细胞交叉污染

除了微生物污染外，细胞系之间的交叉污染也是实验室中需要警惕的问题。

例如：

•不同细胞同时操作

•标识管理不规范

•移液器或枪头使用不当

都可能导致细胞系混杂，最终影响实验结果。

03如何降低细胞培养污染风险？

在细胞培养中，与其事后补救，不如从源头控制风险。

常见的预防措施包括：

规范操作流程

•在生物安全柜中完成操作

•减少培养容器暴露时间

•定期清洁培养箱和实验环境

建立良好的细胞管理习惯

•定期进行支原体检测

•合理进行细胞冻存与复苏

•避免不同细胞系同时操作

选择稳定可靠的培养耗材

细胞培养过程中使用的培养瓶、培养板、移液管及离心管等耗材，本身也是细胞培养体系的重要组成部分。

04 耐思细胞培养类耗材

在细胞培养过程中，稳定的实验耗材可以有效降低人为操作带来的不确定性。

•细胞培养瓶 / 培养板

◦高透明度，便于观察细胞形态与贴壁状态

◦稳定的表面性能，支持贴壁细胞培养需求

◦针对贴壁细胞培养需求，耐思细胞培养类耗材提供 TC 处理与未 TC 处理 两种规格，可根据具体实验场景灵活选购。

◦TC（Tissue Culture）表面处理通过对高品质聚苯乙烯（PS）基材表面进行受控改性，在不添加生物涂层的前提下提升表面亲水性并引入稳定极性官能团，从而增强细胞附着能力，促进贴壁细胞快速铺展与稳定生长。

 

•离心管 / 冻存管

◦良好密封性，降低细胞转移与储存过程中的风险

◦适用于细胞收集、冻存及复苏等基础操作

•血清移液管 / 吸头

◦内壁光滑，液体残留少

◦超强疏水性、超低吸附性

◦帮助降低人为操作带来的不确定因素

产品细胞培养类耗材均保证：

•无菌

•无热源/内毒素

•无细胞毒性、

•无 DNA、无 DNase/RNase

在细胞培养实验中，污染并不是偶然事件，而是最常见的实验挑战之一。理解污染来源、建立规范操作习惯，并配合稳定可靠的实验耗材，是保持细胞培养体系长期稳定的关键。